|
Изучена терапевтическая эффективность нового отечественного индуктора интерферона - циклоферона на модели экспериментального герпетического кератоконъюнктивита у кроликов. Показано, что данная модель воспроизводит основные клинические и патологические аспекты герпетических поражений глаз у человека. Циклоферон, подобно известному индуктору интерферона полудану, достоверно усиливает процессы воспаления, ускоряет последующую регенерацию тканей глаза и снижает смертность животных от генерализации инфекции. Ключевые слова:
Вирусы простого герпеса (ВПГ) широко циркулируют в человеческой популяции (антитела к ВПГ обнаруживаются у 98-100% взрослого населения). Герпетические инфекции обычно относят к оппортунистическим инфекциям, так как тяжесть их течения, как правило, связана с иммунодефицитами, вызванными основными заболеваниями. Герпетические инфекции часто осложняют течение ВИЧ-инфекции, иммуносупрессивную терапию при пересадке органов и тканей, онкологические заболевания. У этих групп больных существует высокий риск прогрессирования кожно-слизистых герпетических поражений, а также генерализации инфекционного процесса с поражением внутренних органов, что может являться непосредственной причиной смерти.
Одним из проявлений герпетической инфекции является офтальмогерпес, составляющий от 20 до 50% всех воспалительных заболеваний роговицы. Более чем у половины всех больных он вызывает рецидивы, что нередко приводит к слепоте [1-3].
Многолетний опыт использования индуктора интерферона полудана (синтетического комплекса полирибоадениловой и полирибоуридиловой кислот) при лечении герпетических заболеваний глаз показал актуальность и перспективность применения препаратов этого типа.
В настоящее время из известных индукторов интерферона и иммуномодуляторов в терапии герпетической инфекции используются: пирогенал и продигиозан (липополисахариды бактериального происхождения), а также препараты, представляющие собой нативную двуспиральную РНК - ларифан (репликативная форма фага f2) и ридостин (дрожжевая двуспиральная РНК) [4, 5].
Новым высокоактивным индуктором экзогенного интерферона альфа/бета типа является циклоферон, производимый Научно-технологической фармацевтической фирмой "Полисан" (Санкт-Петербург). Циклоферон относится к числу низкомолекулярных соединений класса акридонов и отличается практическим отсутствием токсичности. При использовании циклоферона интерферон продуцируется в основном В-лимфоцитами в органах, богатых лимфоидной тканью (селезенка, печень, легкие). Ранее была показана высокая эффективность циклоферона при лечении герпетических поражений кожи и слизистых и коррекции данным препаратом нарушений иммунного и интерферонового статуса при иммунодефицитах различного происхождения [6]. В настоящей работе приведены данные об эффективности лечения циклофероном экспериментального офтальмогерпеса.
Животные и вирус. Материалом для данного исследования послужили 13 здоровых кроликов-альбиносов. У всех животных моделировали герпетический кератит путем нанесения культуры вируса простого герпеса на предварительно надсеченную роговицу левого глаза. Насечки (по две - равной длины 2-2,5 мм) были выполнены скарификатором во взаимно перпендикулярных плоскостях в оптической зоне роговицы. В работе использовали вирус простого герпеса 1 типа штамма ЕС, выделенный от больной, страдающей рецидивирующим herpes labialis. Особенностью этого штамма является способность вызывать менингоэнцефалит и энцефалит при периферических путях заражения (Львов Н.Д. и др., 1989).
Интактный правый глаз кроликов оставался контрольным.
Все животные были разделены на три группы (соответственно по 5, 3 и 5 кроликов). Животным из первой группы под конъюнктиву больного глаза вводили по 0,3 мл 12,5% раствора циклоферона один раз в сутки на 4, 5, 7, 9, 11, 13, 16, 19, 22 и 25 день после заражения. Кроликам из второй группы под конъюнктиву в качестве препарата сравнения вводили полудан в объеме 0,2 мл по той же схеме. Доза вводимых под конъюнктиву препаратов соответствовала суточной дозе для взрослого человека. Третья группа кроликов, не получавших лечения, была контрольной.
Клиническая оценка патологического процесса. Офтальмологическое обследование включало осмотр глаз в боковом (фокальном) освещении, с использованием 0,1% раствора флюоресцеина натрия. Интенсивность прокрашивания роговицы определяли по четырехбалльной шкале: 0 - отсутствие прокрашивания; 1 - едва заметное нестойкое прокрашивание; 2 - выраженное поверхностное прокрашивание инфильтрата; 3 - резко выраженное прокрашивание воспалительного инфильтрата во всю толщу. Также по четырехбалльной шкале измеряли и плотность васкуляризации роговицы: 0 - отсутствие врастания сосудов в прозрачные слои роговицы; 1 - врастание в роговицу единичных сосудов; 2 - вросшие в роговицу сосуды образуют "венчик", в котором дифференцируются отдельные сосуды; 3 - вросшие сосуды образуют сплошной красный "ореол" в прозрачных участках роговицы.
Аналогичным способом определяли и выраженность острого иридоциклита: 0 - отсутствие его признаков; 1 - стушеванность рисунка радужки; 2 - то же в сочетании с миозом; 3 - резко выраженное воспаление переднего отдела сосудистой оболочки глаза в сочетании с выпотом фибрина в переднюю камеру или образованием гипопиона. Оценку воспалительных изменений конъюнктивы производили, ориентируясь на следующие параметры: 0 - отсутствие воспалительных изменений; 1 - воспалительная инъекция сосудов конъюнктивы; 2 - то же в сочетании с выраженным слизистым или слизисто-гнойным отделяемым из конъюнктивальной полости; 3 - то же в сочетании с хемозом.
Выделение вируса. На 4, 9, 14, 20 и 25 сутки развития инфекции у животных брали мазки с зараженного глаза и использовали для прямого вирусовыделения. Материал смыва разводили в 1 мл питательной среды, содержащей 1% сыворотки крупного рогатого скота, 5 мкг/мл фунгизона, 80 мкг/мл гентамицина и готовили ряд разведений: от 10-1 до 10 -4.
Культуру клеток карциномы легкого человека А549 сеяли в 96-луночные планшеты по 100 мкл в лунку в концентрации 2x105 кл/мл и культивировали при 37 ?С в атмосфере 5% СО2 до образования монослоя. Клеточный монослой отмывали от ростовой среды раствором Хенкса, и в каждую лунку добавляли по 100 мкл соответствующих разведений вирусного инокулята, инкубировали 1 ч при 37 ?С в атмосфере 5% СО2, затем доводили объем до 200 мкл поддерживающей средой, содержащей 1% сыворотки крупного рогатого скота, 5 мкг/мл фунгизона и 80 мкг/мл гентамицина. На каждое разведение исследуемого материла отводилось по 4 лунки. Учет результатов проводился на 7 сутки по наличию специфического вирусного ЦПД, с определением титров вируса, вызывающих поражение 50, 75 и 25% клеток в культуре соответственно.
Для выделения вируса из ткани мозга участок ствола мозга, изолированного на 11 день после заражения, объемом 1 см3 был растерт в ступке и разведен в 3 мл поддерживающей среды. Материал центрифугировали в течение 30 мин при 6000 об/мин, и из надосадочной жидкости готовили серии разведений от 10-1 до 10-5. Контроль морфологии вирионов проводили с помощью метода электронной микроскопии вирусных суспензий, негативно контрастированных 1,5% раствором фосфорновольфрамовой кислоты (рН 7,0), на электронном микроскопе JEM-100S при ускоряющем напряжении 80 кВ.
Гистологическое исследование течения офтальмогерпеса.
Глазные яблоки животных, погибавших в ходе опыта и выживших до конца эксперимента, фиксировали в жидкости Буэна, обезвоживали и заливали в парафин. Из приготовленных блоков готовили срезы толщиной 3-4 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином и анализировали под световым микроскопом. Морфологическому исследованию подвергались комплексы, состоящие из роговицы, конъюнктивы, радужной оболочки и передних отделов сетчатки.
Далее...
Написать комментарий
|
