Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://kodomo.cmm.msu.ru/FBB/year_02/science_1/diplom_2006/Zatsepina_1.doc Дата изменения: Mon Dec 12 17:21:26 2005 Дата индексирования: Sat Dec 22 07:29:54 2007 Кодировка: koi8-r

ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИИ БЕЛКА КЛЕТОЧНОГО ЯДРА Surf-6 В МЕТАБОЛИЗМЕ КЛЕТОК
МЛЕКОПИТАЮЩИХ


Руководитель: Зацепина О.В., д.б.н. Тел.: 330-66-47, 779-23-66

e-mail: zatsepina_olga@mail.ru

Согласно последним данным масс-спектрометрического анализа, ядрышки
клеток человека содержат около 700 белков. Значительная их часть
обеспечивает основную функцию ядрышка, направленную на биогенез рибосом.
Однако около трети белков, выявляемых в составе выделенных ядрышек, изучены
плохо, а их роль в клеточном метаболизме до сих пор остается не выясненной.
К таким белкам относится, в частности, специфический белок ядрышка Surf-6.
Этот белок впервые описан в 1996 г. как продукт экспрессии гена Surf-6,
являющегося одним из членов локуса Surfeit в геноме мыши. Позднее ортологи
Surf-6 были описаны в геномах других высших эукариот, что указывает на его
высокую эволюционную консервативность. Уникальным свойством Surf-6 является
отсутствие в его составе каких-либо известных консенсусных
последовательностей, которые могли бы косвенно указывать на роль белка в
метаболизме клетки. У мыши белок Surf-6 имеет электрофоретическую
подвижность, соответствующую мол. массе около 43 кДа, локализуется,
преимущественно, в ядрышках клеток, а его содержание увеличено в активно
пролиферирующих клетках по сравнению с покоящимися клетками (Гурченков и
др., 2005). Последнее обстоятельство указывает на возможное участие бека
Surf-6 в регуляции клеточного цикла.
Основная цель настоящей работы - получение ПЕРВЫХ экспериментальных
данных об экспрессии белков - известных регуляторов клеточного цикла в
клетках мыши линии NIH/3Т3, стабильно трансфицированных плазмидами,
обеспечивающими повышенную экспрессию гена белка Surf-6 или, наоборот,
истощение пула белка в клетках. Обе линии стабильно трансфицированных
клеток были получены в нашей лаборатории.
Конкретные задачи работы включают:
1. Анализ экспрессии гена белка c-Myc, регулирующего уровень Surf-
6 в опухолевых клетках человека, в клетках мыши линии NIH/3Т3,
стабильно трансфицированных плазмидами - регуляторами уровня
Surf-6. Основной метод - иммуноблоттинг с использованием
антител к c-Myc и Surf-6.
2. Анализ экспрессии белка PCNA (ДНК полимераза ?) в
трансфицированных клетках. Основной метод - иммуноблоттинг с
использованием антител к PCNA и Surf-6.
3. Оценка пролиферативной активности клеток после изменения
экспрессии Surf-6 на уровне белка в генетически
модифицированных клетках. Основные подходы - проточная
цитофлуориметрия и (или) методы современного микроскопического
анализа.

В лаборатории имеется все необходимое для выполнения этой работы.


Ожидается, что полученные результаты войдут в статью, посвященную
исследованию роли белка Surf-6 в метаболизме эукариотических клеток.