Документ взят из кэша поисковой машины. Адрес оригинального документа : http://kodomo.cmm.msu.su/FBB/StudentScience/diplom_2007/Severin_1.doc Дата изменения: Mon Apr 9 17:09:23 2007 Дата индексирования: Mon Oct 1 23:22:40 2012 Кодировка: koi8-r

Тема дипломной работы на 2007/2008 год.
Руководитель: к.б.н., заведующий лаборатории программируемой смерти
одноклеточных организмов Ф.Ф. Северин.
Место выполнения: Лаборатория программируемой смерти одноклеточных
организмов, отдел биоэнергетики микроорганизмов, НИИ ФХБ
им.А.Н.Белозерского

Поиск генов участвующих в активной деградации митохондриальной ДНК дрожжей
Saccharomyces cerevisiae.

Митохондрии дрожжей содержат небольшие кольцевые последовательности
ДНК (мтДНК), численность которых составляет несколько десятков копий на
клетку. Наличие митохондриальной ДНК (мтДНК) необходимо для нормального
функционирования митохондрии. Клетки с нарушениями в дыхательной цепи
митохондрий (Rho- клетки) в течении нескольких поколений теряют мтДНК и
становятся Rho0. Известно, что Rho- и Rho0 клетки растут медленней, но в
стрессовых условиях обладают значительно большей выживаемостью по сравнению
с нормальными (Rho+) клетками. Дрожжи Saccharomyces cerevisiae способны за
счёт брожения поддерживать нормальный энергетический баланс клетки, поэтому
при некотором спектре неблагоприятных воздействий Rho- и Rho0 клетки имеют
преимущество перед Rho+ клетками. В нормальной популяции гаплоидных штаммов
S. cerevisiae присутствует несколько процентов Rho- и Rho0 клеток.
Возникает вопрос: обладают ли клетки S. cerevisiae активным механизмом,
превращающим нормальные клетки в Rho- клетки, позволяющим переживать
некоторые неблагоприятные условия.

В ходе дипломной работы предполагается выполнить следующие задачи:
1) Провести мутагенез дрожжей S. cerevisiae. 2) Протестировать полученные
мутанты на способность образовывать Rho- клеток и отобрать те, в которых
эта способность достоверно снижена. 3) Определить гены, нарушенные в
отобранных штаммах. 4) Проанализировать возможную роль отобранных генов в
активном процессе деградации мтДНК.
В процессе работы будут использованы следующие методы: Молекулярно-
биологические методы: - Выделение ДНК из бактерий и дрожжей, Полимеразная
цепная реакция (ПЦР), Трансформация бактериальная и дрожжевая. Электрофорез
ДНК. Экспрессия белков в бактериях и дрожжах. Микробиологические методы: -
Культивирование дрожжей и бактерий. Биохимические методы: - Электрофорез
белков. Определение концентрации белков. Микроскопические методы: - Методы
флюоресцентной микроскопии окрашивание клеток на: активные формы кислорода,
ДНК, определение внутриклеточной локализации рекомбинантных белков.


Координаты для связи: НИИ ФХБ им. А.Н.Белозерского к 218
Тел 939-31-07
Фёдор Северин или Святослав Соколов