ЗАДАЧА ї 7

љМЕТОДЫ АНАЛИЗА В БИОХИМИИ

Источники ферментов и их специфика. Принципы выбора источника для выделения требуемого фермента. Внутриклеточные, мембранные и секретируемые ферменты.

Гомогенизация биоматериала: приемы и оборудование. Приготовление грубых экстрактов.

Основные лабораторные приемы, љиспользуемые при очистке ферментов. Фильтрование, центрифугирование, диализ, гель- и ультрафильтрация, лиофилизация. Аналитические методы, используемые при определении концентрации белков в растворе.

Разделение белков путем осаждения. Изоэлектрическое осаждение, высаливание, осаждение органическими растворителями. Денатурация балластных белков под действием температуры, органических растворителей и путем изменения рН.

Хроматография. Основные принципы и элементы теории элюции. Матрицы для хроматографии. Виды хроматографической элюции. Матрицы для хроматографии. Хроматография высокого давления.

Гель-фильтрация. Разделение макромолекул и обессоливание белков. Определение параметров колонки и хроматографического процесса. Определение молекулярной массы белков.

Ионообменная Хроматография. Анионая и катионообменная Хроматография. Сильные и слабые ионообменники. Факторы среды и свойства белков, влияющие на эффективность разделения. Изократическая и градиентная элюция.

Аффинная Хроматография. Основные принципы. Эффективность очистки. Групповая аффинность.

Электрофоретические методы. Препаративный и аналитический электрофорез. Нативный электрофорез и электрофорез в присутствии детергентов. Определение степени гомогенности и молекулярной массы Изоэлектрофокусирование. Основной принцип и области применения. Изотахофорез.

Методы седиментационного анализа. Скоростная и равновесная седиментация. Коэффициент седиментации, уравнение Сведберга.

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА.

1.љљ Р. Скоупс. Методы очистки белков, М., Мир, 1985.

2.љљ Л. А. Остерман Хроматография белков и нуклеиновых кислот, М., Наука, 1985.

3.љљ Ч. Кантор, П. Шиммел. Биофизическая химия, М., Мир, т. 2, с. 299-306, 1984.

Дополнительная литература.

1.љљ Д. Фрайфелдер. Физическая биохимия., М. Мир. 1980.

2.љљ Практикум по биохимии. Под ред. С. Е. Северина и љГ. А Соловьевой. М. МГУ. 1989.

3.      Дж Бейли. Д. Оллис. Основы биохимической инженерии. М. Мир. 1989.

4.      4.љљ Г. А. Кочетов, Практическое руководство по энзимологии, М, 1980.