Курсовая работа студента 4-го курса кафедры молекулярной биологии Биологического факультета МГУ.
Москва, 2001
Авторские права сохранены. Любое копирование данного текста и/или его фрагментов без разрешения автора запрещено и преследуется в соответствии с действующим законодательством РФ.

Содержание   В начало...
 
 

1. Введение

2. Литературный обзор на тему "Структура и функции пропептидов сериновых протеиназ микроорганизмов"

2.1 Структура пропептидов

2.1.1. Характеристика генов пропептидов

2.1.2. Сравнительный анализ структуры пропептидов

2.1.3. Пространственная структура пропептидов

2.2. Функциональные аспекты взаимодействия пропептида с активным центром фермента

2.2.1. Роль пропептида в формировании простанственной структуры фермента

2.2.2. Роль в клеточном транспорте

2.2.3. Взаимодействие пропептида с ферментом на примере семейства субтилизинов

2.2.4. Изучение процессинга альфа-литической протеиназы Lysobacter enzymogenes и химотрипсинподобных протеиназ Streptomyces griseus

3. Материалы и методы

3.1. Материалы

3.1.1. Стандартные растворы

3.1.2. Среды

3.1.3. Добавки к средам

3.1.4. Ферменты

3.1.5. Вектор и штаммы

3.1.6. Ген глутамилэндопептидазы B. licheniformis GseBL

3.1.7. Праймеры

3.1.8. Маркеры размера и молекулярной массы

3.2. Методы

3.2.1. Трансформация клеток E.coli

3.2.2. Очистка ДНК из агарозного геля методом Gene-Clean (Bio 101)

3.2.3. Выделение плазмидной ДНК модифицированным методом щелочного лизиса по Бирнбойму и Долли

3.2.4. Гель-электрофорез белков в ПААГ в присутствии ДСН

3.2.5. ПЦР-протокол

4. Результаты

4.1. Создание экспрессионной конструкции для пропептида глутамилэндопептидазы B. licheniformis

4.1.1. Выбор вектора

4.1.2. Клонирование участка гена GseBL

4.2. Экспрессия генов пропептидов

4.2.1. Общее описание полученных экспрессионных систем

4.2.2. Оптимизация условий экспрессии

4.3. Очистка рекомбинантных пропептидов

4.3.1. Аффинная хроматография

4.3.2. Аффинная очистка на иммобилизованном ферменте

4.3.3. Очистка методом селективной термической денатурации

5. Обсуждение

6. Выводы

7. Благодарности

8. Список литературы