|
В.В. Михайличенко, С.А. Сельков, А.С. Есипов
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования; Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.Отта
Проблемы репродукции, 3-1999, с.64-65
В начало...
Описывается метод определения концентрации сперматозоидов в эякуляте но окрашенному мазку спермы. Первоначально подсчитывается среднее количество сперматозоидов в одном поле зрения. Используя ряд формул, уравнение и график линейной регрессии, по данному показателю определяется величина концентрации спермы (количество сперматозоидов в 1 мл эякулята). Применение метода обосновано для тех случаев, когда концентрация спермы не превышает 120 млн/мл.
Ключевые слова:
Настоящая работа представляет собой продолжение опубликованного ранее обоснования нового способа определения концентрации спермы в эякуляте по окрашенному мазку спермы [1]. Однако в предыдущей статье не было представлено конкретное описание метода, а поэтому приведенные там факты не могут без предварительной обработки быть применимы в практической работе. Кроме того, использовавшаяся нами морфометрическая сетка, далеко не всегда доступна практическим врачам.
В настоящей статье мы предлагаем ряд расчетов, позволяющих достаточно легко использовать метод определения концентрации спермы по мазку, раскрываем сущность уравнения линейной регрессии, прилагая его графическое изображение, с помощью которого можно по количеству сперматозоидов в 1 мм2 площади мазка определить концентрацию спермы (количество сперматозоидов в 1 мл эякулята).
Рациональным является сочетание исследования нативной спермы при максимальном увеличении 400-600 раз с ее цитологическим исследованием, позволяющим при увеличении 900-1500 раз оценивать строение отдельных сперматозоидов и раздельно подсчитывать лейкоциты, макрофаги и клетки сперматогенеза, различия между которыми могут быть нечеткими при малом оптическом усилении. Предлагаемая нами методика позволяет исключить требующую достаточной кропотливости работу с меланжером и счетной камерой. Особенно это удобно при исследовании образцов спермы с повышенной вязкостью. Ограничением метода является то, что он рассчитан для тех случаев, когда концентрация сперматозоидов не превышает 120 млн/мл.
Техника выполнения
Через 30-40 мин (время, достаточное для разжижения нормальной спермы) на край предметного стекла наносят 0,1 мл эякулята. Краем второго предметного стекла капля однократно размазывается по поверхности первого стекла. Полученный мазок высушивается при комнатной температуре. Следующим этапом являются фиксация мазка. Для этой цели можно использовать метиленовый спирт или смесь Никифорова (эфир и этиленовый спирт, 1:1). Зафиксированный мазок должен быть хорошо высушен при комнатной температуре. Для окрашивания можно использовать любой краситель, в том числе и метиленовый синий. Однако для цитологического исследования необходимо применять красители, специфически окрашивающие ядра клеток. Наиболее предпочтительными являются методики Папаниколау и Майера-Стиасни [2].
Необходимым показателем для определения концентрации спермы (млн/мл) по окрашенному мазку является среднее количество (n) сперматозоидов в одном поле зрения микроскопа. Подсчет желательно осуществлять не менее чем в 10 полях в середине мазка. Определив среднее количество сперматозоидов в одном поле зрения, необходимо рассчитать этот показатель на 1 мм2 площади (S0) мазка. Последовательность расчетов должна быть следующей: 1) определение увеличения (Y) микроскопа, которое равно произведению увеличения окуляра и увеличения объектива, 2) определение площади (S) одного поля зрения микроскопа. Известно, что при увеличении 1000 раз диаметр (D) поля зрения равен 0,15 мм [3]. При этом диаметр (d) использованного поля зрения рассчитывается по формуле:
d = (1000D)/Y (мм).
Площадь (S) вычисляется по формуле:
S = 3,14?(d/2)2(мм2);
3) определение количества (N) сперматозоидов в 1 мм2 поверхности исследуемого мазка спермы:
N = n?S0/S.
Далее, значения показателя N подставляются в график (ось абсцисс), составленный в соответствии c уравнением линейной регрессии (у = 17+0,08х) [1], и на оси ординат через точку пересечения линии регрессии определяется концентрация сперматозоидов в нативном эякуляте (млн/мл) (см. рисунок).
 |
Рисунок. График линейной регрессии для определения концентрации спермы.
По оси абсцисс - количество клеток в 1 мм2; по оси ординат - концентрация спермы, млн/мл. |
1. Михайличенко B.B., Есипов А.С., Арутюнян Н.А., Котенко А.И., Целух Ю.С., Адхамов Б.М. Определение количества сперматозоидов в 1 мл эякулята по окрашенному мазку спермы. Клиническая лабораторная диагностика 1997; 9: 21-22.
2. Schirren С. Praktische andrologie. Basel etc 1982; 102.
3. Хэм А., Кормак Д. Гистология. M 1983: 1: 254.
Написать комментарий
|
