|
О.А. Леонтьева, О.А. Воробьева
НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН
Проблемы репродукции, 3-1999, с.29-36
В начало...
(Окончание)
Изменение частоты встречаемости различных типов морфологических аномалий при выделении фракции подвижных форм было проанализировано нами с использованием двух различных методических подходов к оценке морфологии. При этом каждый сперматозоид относили только к одному морфологическому типу в соответствии с приведенной выше классификацией (рис. 1) - первый метод, или же учитывали все имеющиеся у сперматозоида аномалии, относя клетки с сочетанной патологией к нескольким морфологическим типам одновременно - второй метод. При использовании второго методического подхода было показано достоверное снижение (p<0,0001) частот встречаемости всех типов аномалий в прогрессивно подвижной фракции по сравнению с нативным эякулятом. В то же время применение первого метода оценки морфологии не выявило при этом изменения доли клеток с уменьшенными размерами акросомы, а также патологией шейки и срединного отдела. Проанализируем возможные причины этого противоречия.
При использовании стандартного подхода у сперматозоидов с сочетанной патологией фиксировалась только одна аномалия, доминирующая с точки зрения иерархической системы классификации. Так как патология шейки занимает низшую ступень в используемой нами иерархии морфологических аномалий, то при стандартном анализе отнесение клетки к данному типу означает отсутствие у нее каких-либо других патологий. В то же время аномалия шейки часто сочетается с другими формами патологий, так как частота ее встречаемости, выявленная при анализе, учитывающем множественные аномалии, заметно выше, чем при использовании стандартного подхода (17,2 0,9% и 3,8 0,3% соответственно). В связи с тем, что частота встречаемости аномалий шейки во фракции подвижных форм достоверно снижается по сравнению с нативным эя-кулятом (табл. 2), а доля клеток, имеющих только данную патологию, сохраняется на прежнем уровне (табл. 3), можно сделать вывод о том, что наблюдаемое изменение происходит в основном за счет элиминации сперматозоидов, имеющих сочетанную патологию. Аналогично можно объяснить снижение частоты встречаемости аномалий, характеризующихся уменьшением размера акросомы, при неизменной доле клеток, имеющих данную патологию в качестве основной либо единственной. Сопоставляя выявленные с использованием разных методических подходов изменения частот встречаемости аномалий шейки и доли клеток с уменьшенными размерами акросомы, можно сделать вывод о том, что при выделении подвижной фракции, элиминация сперматозоидов, имеющих только одну из данных аномалий, неэффективна.
Изменение в прогрессивно подвижной фракции по сравнению с нативным эякулятом частоты встречаемости клеток с множественными патологиями было проанализировано нами не только на основании косвенных данных (см. выше), но и непосредственно, путем подсчета доли сперматозоидов с сочетанной патологией. При стандартном подходе к оценке морфологии доля клеток с множественными аномалиями не фиксируется. В то же время установлено, что среднее число аномалий в расчете на один сперматозоид (индекс деформации или индекс тератоспермии) обладает в программе ЭКО большим прогностическим значением, чем доля нормальных форм в эякуляте. Нами показано, что при выделении из эякулята фракции подвижных клеток, частота встречаемости сперматозоидов с множественными аномалиями достоверно снижается (в среднем в три раза). При этом не было отмечено изменения доли аномальных сперматозоидов, не имеющих сочетанной патологии. Это позволяет сделать вывод о том, что при выделении из нативного эякулята фракции подвижных форм наблюдаемое снижение доли аномальных сперматозоидов происходит в основном за счет элиминации клеток, имеющих множественные морфологические патологии.
Таким образом, применение комбинированной методики выделения прогрессивно подвижной фракции позволяет получить популяцию сперматозоидов со значительно лучшими морфологическими характеристиками по сравнению с нативным эякулятом как при нормо-, так и при патоспермии.
Выводы
1. При выделении из эякулята фракции прогрессивно подвижных клеток доля морфологически нормальных сперматозоидов, а также клеток с легкой формой патологии достоверно повышается в среднем в 2,3 и в 1,6 раза соответственно. Эта закономерность наблюдается как при нормо-, так и при патоспермии.
2. Индивидуальные различия по частоте встречаемости нормальных сперматозоидов в нативном эякуляте сохраняются и в прогрессивно подвижной фракции, вне зависимости от таких показателей сперматогенеза как концентрация и подвижность клеток.
3. Снижение доли аномальных сперматозоидов при выделении из нативного эякулята подвижной фракции происходит в основном за счет элиминации клеток, имеющих множественную морфологическую патологию.
4. При выделении подвижной фракции, элиминация сперматозоидов, имеющих только аномалии шейки или акросомальную область уменьшенного размера, неэффективна.
5. Анализ морфологии сперматозоидов с учетом всего комплекса патологий, характерных для каждой отдельной клетки, более адекватно по сравнению со стандартным методом описывает клеточную популяцию и динамику ее изменения при выделении подвижной фракции.
1. Marsh S., Bolton V., Braude P. The effect of morphology on the ability of human spermatozoa to penetrate zona-free hamster oocytes. Aum Reprod 1987; 2: 499-503.
2. Katz D., Diel L., Overstreet J. Differences in the movement of morphologically normal and abnormal human seminal spermatozoa. Biol Reprod 1982; 26: 556-570.
3. Katz D., Morales P., Samuels S., Overstreet J. Mechanisms of filtration of morphologically abnormal human sperm by cervical mucus. Fertil Steril 1990; 54: 513-516.
4. Rogers B., Bentwood B., Campen H., Helmbrecht G., Soderdahl D. Sperm morphology assesment as an indicator of human fertilizing capacity. J Androl 1983; 4: 119-125.
5. Angelopoulos T., Moshel Y.A., Lu L., Macanas E., Grifo J.A., Krey L.C.
Simultaneous assessment of sperm chromatin condensation and morphology before and after separation procedures: effect on the clinical outcome after in vitro fertilization. Fertil Steril 1998; 69:740-747.
6. Lee J.D., Kamiguchi Y., Yanagimachi R. Analysis of chromosome constitution of human spermatozoa with normal and aberrant head morphologies after injection into mouse oocytes. Hum Reprod 1996; 9: 1942-1996.
7. Воробьева О.А., Скрипкина О.А., Корсак В.С. Анализ морфологии сперматозоидов в программе ЭКО. Пробл репрод 1995; 3: 71-76.
8. Bostoffe E., Serup J., Rebbe H. Relation between morphologycally abnormal spermatozoa and pregnancies obtained during a twenty-year follow-up period. Int J Androl 1982; 5: 379-386.
9. Grow D.R., Oehninger S., Seltman H.J.,Toner J.P., Swanson R., Kruger
T. Sperm morphology as diagnosed by strict criteria: probing the impact of teratozoospermia on fertilization rate and pregnancy outcome in a large in vitro fertilization population. Fertil Steril 1994; 62: 559-567.
10. Kruger T.F., Menkveld R., Stander F., Lombard C.J. et al. Sperm morphologic features as a prognostic factor in in vitro fertilization. Fertil Steril 1986; 46: 1118-1123.
11. Kruger T.F., Acosta A.A., Simmons K.F., Swanson R.J. et al. Predictive value of abnormal sperm morphology in vitro fertilization. Fertil Steril 1988; 49: 112-117.
12. Francavilla F., Romano R., Santucci R., Poccia G. Effect of sperm morphology and motile sperm count on outcome of intrauterine insemination in oligospermia and/or asthenozoospermia. Fertil Steril 1990; 53: 892-897.
13. Florence L.H.Ng, De Yi Liu, Gordon Baker H.W. Comparison of Percoll and swim-up methods for sperm preparation from abnormal semen samples. Hum Reprod 1992; 2: 261-266.
14. Shalika S., Dugan K., Pelesh D., Padilla S. A Mono-Percoll separation technique improves sperm recovery of normal and male factor specimens when compared with the swim-up technique. Hum Reprod 1995; 10: 3195-7.
15. Chen S.U., Ho H.N., Chen H.F., Chao K.H., Lin H.R., Huang S.C., Lee T.Y., Yang Y.S. Comparison between a two-layer discontinuous Percoll gradient and swim-up for sperm preparation on normal and abnormal semen samples. Assist Reprod Genet 1995; 12(10): 698-703.
16. Van Der Zvalmen P., Bertin Segal G., Geerts L., Debauche C., Schoysman R. Sperm morphology and IVF pregnancy rate: comparison between Percoll gradient centrifugation and swim-up procedures. Hum Reprod 1991; 4: 581-588.
17. Воробьева О.А., Семенова Е.В., Филатов М.В., Скрипкина О.А. Оценка методом проточной цитофотометрии эффективности очистки сперматозоидов в программе ЭКО. Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщины. Материалы XXIV научной сессии НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН 1995; 53-54.
18. Cohen J. A Practical Guide to Microsurgical Fertilizationin the Human. at Cohen J., Malter H.E., Talansky B.E., Grifo J. Micromanipulation of Human Gametes and Embryos. Raven Press, New York. 19. Hall J.A., Fishel S.B., Timson J.A., Dowell K., Klentzeris L.D. Human sperm morphology evaluation pre- and post-Percoll gradient centrifugation. Hum Reprod 1995; 36: 342-6.
20. Makler A. Modern methods in semen analysis evaluation, In: Behr-man S., Kistener R., Patton G. ed. Pregress in infertility. Boston: Little Brown C. 1988; 633-661.
21. Singer R., Fish B., Levinsky H., Zukerman Z., Sagiv M., Cohen A., Barnet M., Lurie B.B., Lahav M. Separation of human semen on Percoll gradients: effect on percentage of motile and morphologically normal sperm and proportion of acrosome reacted sperm. Int J Fertil Menopausal Stud 1995; 37(3): 161-6.
22. Hughes C.M., Lewis S.E., McKelvey-Martin V.J., Thompson W. Percentage of normal sperm heads is significantly increased by Percoll separation of semen. Int J Androl 1998; 13: 116-9.
23. Lim C.C., Lewis S.E., Kennedy M., Donnelly E.T., Thompson W. Human sperm morphology and in vitro fertilization: sperm tail defects are prognostic for fertilization failure. Andrologia 1998; 69(4): 43-47. 24. World Health Organisation. WHO laboratory manual for examination of human semen and semen-cervical mucus interacnion. third ed.
Cambrige: University, 1992: 13-18.
25. Menkveld R., Rhemrev J.P.T., Franken D.R., Vermeiden J.P.V., Kruger T.F. Acrosomal morphology as a novel criterion for male fertility diagnosis: relation with acrosin activity, morphology (strict criteria), and fertilization in vitro. Fertil Steril 1996; 3: 637-644.
26. Parinaud J., Mieusset R., Viefez J., Labal B. et al. Influence of sperm parameters on embryo quality. Fertil Steril 1993; 5: 888-892.
Написать комментарий
|
